Application of high-sensitivity flow cytometry in combination with low-voltage scanning electron microscopy for characterization of nanosized objects during platelet concentrate storage

作者:Fedorov, A ; Kondratov, K ; Kishenko, V ; Golovkin, A ;等

来源:Platelets.2020 ;31(2) :226-235

翻译:陈洁润

摘要

血小板浓缩物在临床上用于治疗和预防与血小板缺乏或机能障碍有关的疾病。血小板浓缩物的特性在输血前储存期间逐渐变化，影响其临床有效性和输血不良反应的风险。血小板衍生的膜囊泡的存在是血小板浓缩物的重要特征。由于它们的功能性，血小板衍生的囊泡的数量和分子组成的变化对血小板制品的临床特性具有重大影响。膜囊泡的不同亚群的存在需要能在单个囊泡水平上提供信息的分析方法。这些方法包括流式细胞仪和电子显微镜。然而，常规的流式细胞术具有一定的局限性，原因是许多血小板衍生的膜囊泡的直径小于其检测极限。由于需要涂覆一层导电材料，限制了传统的扫描电子显微镜的使用，阻碍了这些膜囊泡的检测。在这里，结合使用高灵敏度流式细胞仪和低压扫描电子显微镜，以提高储存过程中血小板浓缩液中存在的纳米级物质检测的灵敏度和分辨率。在储存期的第2天和第7天研究了来自8位健康成人供者的无菌浓缩血小板。通过差速离心获得纳米级物质的成分。使用荧光团偶联的抗体检测源自血小板（CD41），红细胞（CD235a），白细胞（CD45）和内皮细胞（VEGFR2）的标志物阳性膜囊泡。通过低电压扫描电子显微镜观察血小板浓缩物及其组分中直径在25 ~ 700纳米的近球形物体。在储存的第7天，直径小于100纳米的物质被附着在伪足状突起的末端并聚集在其附近。高灵敏度流式细胞仪显示，在存储期间，CD41（阳性）囊泡的数量增加了五倍以上，标记阴性的纳米物质的数量增加了2倍以上，这些标记阴性纳米物质没有携带任何被研究的细胞类型特异性标记。对于直径约100nm磁珠当量的物质，观察到CD41（阳性）囊泡和标记阴性的纳米物质的丰度都发生了显著变化。总体而言，这些结果强调了在血小板浓缩液储存过程中应用高灵敏度方法来监测细胞来源的具有纳米特性物质的重要性。

关键词

高灵敏度流式细胞仪，低压扫描电子显微镜，膜囊泡，纳米尺寸的物质，血小板浓缩液的储存